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基因过表达

遗传基因过表现

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基因功能研究中通常需要上调目的基因的表达来观察表型的变化。过表达是将目的基因在宿主细胞大量表达的过程,其基本原理是将目的基因构建到工具载体上,导入细胞使基因实现大量转录和翻译,从而实现基因产物的过表达。工具载体通常包括原核表达载体、普通真核表达载体、慢病毒载体、腺相关病毒载体、腺病毒载体和逆转录病毒载体等。

产品的载体介绍英文


根据实验需要不同,目的基因大小等选择不同的载体,包括真核表达载体和病毒载体等均可以实现编码基因和非编码基因的过表达。

表达系统 真核表达载体 慢病毒载体 重组腺相关病毒载体 重组腺病毒载体
载体基因特性 双链DNA质粒 RNA逆转录病毒 单链DNA病毒 双链DNA病毒
外源基因表达时间 24h开始表达,持续3-7天 2-4天开始表达,长时间稳定表达 7-14天开始表达 1-2天开始表达
插入片段大小 8kb左右 4kb左右 2.8kb左右 4kb左右
稳定细胞株筛选 难操作 可以 不可以 不可以,瞬时表达
细胞实验 细胞系,部分转染效率低 首选,广谱,感染效率高 细胞系,部分血清型转染效率低 广谱,感染效率高
动物实验 不适合 适合,根据观察时间和注射部位 首选,根据观察时间和注射部位 免疫原性高,慎选
滴度范围 108~109TU/ml 1012-1013VG/ml 1010-1011PFU/ml

媒介图谱上常见开关元件介绍书

元件名称 类型 用途
启动子 CMV、CAG、EF1a、U6等 广谱或特异启动目的基因的表达
hSyn、CaMKIIα等 特异性启动子,在特定的组织细胞中启动目的基因的表达
蛋白标签 3xFLAG、HA 、6xHis、Myc等 与目的基因融合表达,常用于检测外源蛋白表达水平
荧光图标 EGFP、mCherry、mNeonGreen等 可与目的意义表观遗传相融或者是非相融呈现使用于验测转染、病毒感染结果
抗性基因 Puro、Neo、Hygro、BSD等 真核抗性,常用于稳定株筛选
Amp、Kan 原核抗性,长用于原核细菌和病毒培植,质粒PCR扩增
连接元件 Linker 采用进行连接这两个遗传基因,构建理解不时用,可消减因构建理解对淀粉酶申缩和的功能的损害
IRES、2A 用作连入这两个表观遗传,符合非融入表达爱的效果好
其它元件 WPRE 增加目的基因的表达

承载考虑(部份)


病毒载体的选择,根据实验的需求参考慢病毒腺相关病毒腺病毒逆转录病毒等。

载体类别 编号 载体元件
慢病毒过表达 GL127 pSLenti-CMV-EGFP-3xFLAG-WPRE
GL121 pSLenti-EF1-EGFP-CMV-MCS-WPRE
GL107 pSLenti-EF1-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE
GL122 pSLenti-EF1-EGFP-F2A-BSR-CMV-MCS-WPRE
GL124 pSLenti-EF1-Luc2-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE
腺病毒过表达 H225  pADV-mCMV-MCS-3xFLAG
H201 pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG
H213 pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP
H204 pADV-mCMV-mCherry-HA
腺相关病毒过表达 AOV024 pAAV-CMV-EGFP-P2A-3xFLAG-WPRE
AOV025 pAAV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-WPRE
AOV064 pAAV-hSyn-EGFP-P2A-3xFLAG-WPRE
AOV065 AAV-hSyn-mCherry-P2A-3xFLAG-WPRE
H9429 pAAV-CAG-EGFP-3xFLAG-tWPA
H9525 pAAV-CMV-EGFP-3xFLAG-tWPA
H10881 pAAV-CAG-EGFP-3xFLAG-tWPA
H10886 pAAV-CMV-EGFP-3xFLAG-tWPA

服务性百科

根据客户提供的基因信息,从生物信息学网站上调出该基因的cDNA序列,将cDNA序列构建到工具载体中,根据实验需求过表达编码基因或者非编码基因。针对病毒载体,包装生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验。

艾滋病毒平台业务程序

  • 物种及目的基因名称
    病毒载体要求与选择
    其它特殊需求
  • 病毒表达载体构建
    病毒包装与纯化)
    滴度测定
  • 高滴度的病毒颗粒
    按合同提供对照病毒)
    实验报告

关联新技术咨询项目

  • 表观遗传电磁干扰
  • CRISPR/Cas9
  • 内源性转录刺激/减缓

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